Expresión de anticuerpos de cadena sencilla (ScFv) contra Helicobacter pylori en la levadura Pichia pastoris

Resumen

Introducción. Helicobacter pylori es uno de los agentes causales mas importantes de enfermedades gástricas alrededor del mundo, la detección oportuna de la bacteria evitaría el desarrollo de gastritis y en algunos casos cáncer gástrico. El uso de anticuerpos específicos contra la bacteria permite la detección de ésta en la población microbiana de muestras; desafortunadamente la inducción de estos anticuerpos en vectores bacterianos reduce la eficiencia de la expresión. La levadura metanotrófica Pichia pastoris permite la expresión de grandes cantidades de proteína recombinante con alta calidad, este sistema puede ser utilizado para la expresión de fragmentos de anticuerpos de cadena sencilla específicos a H. pylori para el desarrollo de inmunodiagnósticos.
Material y métodos. Identificación de monoclonales reactivos contra H. pylori cepas ATCC 49396, N2 y J99 a partir de una biblioteca ScFv, caracterización de las clonas seleccionadas y subclonación del gen que codifica para dichos fragmentos de anticuerpo en un vector de expresión de la levadura Pichia pastoris. Inducción y cuantificación de la expresión de anticuerpo.
Resultados y discusión. De 96 clonas posibles se seleccionaron 10 con la mejor reactividad y especificidad contra H. pylori, de éstas se seleccionó la clona 9D para aislar el ScFv y clonarlo en el vector de expresión de la levadura. Los ensayos de cuantificación de expresión mostraron altos rendimientos llegándose a obtener 50 µg/ml de proteína recombinante a las 72 horas de inducción.