Diseño y evaluación de metodologías basadas en PCR-RFLP de ITS2 para la identificación molecular de mosquitos Anopheles spp. (Diptera: Culicidae) de la Costa Pacífica de Colombia

Resumen

Introducción. La dificultad en la identificación de especies anofelinas, debido a la variación intraindividual y similitud interespecífica, ha conducido al desarrollo de herramientas moleculares que permitan la discriminación de especies.
Objetivo. Utilizar herramientas bioinformáticas para desarrollar una PCR-RFLP in silico que permita la identificación molecular de especies pertenecientes al Grupo Oswaldoi registradas en Colombia, y evaluar la utilidad de la PCR-RFLP-AluI desarrollada previamente en nuestro laboratorio, en anofelinos de diferentes localidades.
Material y Métodos. Se realizó un análisis bioinformático utilizando las secuencias ITS2 del Grupo Oswaldoi reportadas en GenBank, para generar patrones de restricción in silico que permitieran discriminar estas especies. Para evaluar la PCR-RFLP-AluI se utilizaron mosquitos colectados en las localidades de Nuquí, Pizarro, Buenaventura y Tumaco, en la Costa Pacífica de Colombia.
Resultados. El análisis bioinformático mostró que la enzima AluI produjo patrones de restricción in silico diferentes para cuatro especies del Grupo Oswaldoi; dos especies más podrían distinguirse con una segunda digestión. La PCR-RFLP-AluI permitió confirmar los resultados de la identificación morfológica y evidenciar algunos problemas de identificación que surgen debido a la variación intraespecífica y similitud interespecie.
Conclusiones. La ampliación de la estrategia de PCR-RFLP-AluI y su aplicación en diferentes zonas del país, permitirá la discriminación rápida y confiable de un mayor número de mosquitos, entre los cuales se encuentran especies de difícil discriminación morfológica. Esta estrategia será de utilidad para el desarrollo de estudios complementarios que permitan un mayor acercamiento al entendimiento de la dinámica de la transmisión de malaria en Colombia.